Điều gì xảy ra nếu bạn thêm quá nhiều enzyme hạn chế?

2024 Tác giả: Stanley Ellington | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2023-12-16 00:25

Tiêu hóa không hoàn toàn có thể xảy ra khi quá nhiều hoặc quá ít men Được sử dụng. Các sự hiện diện của chất gây ô nhiễm trong NS Mẫu DNA có thể ức chế các enzym , cũng dẫn đến tiêu hóa không hoàn toàn. Một vài các enzym hạn chế yêu cầu đồng yếu tố để hoạt động đầy đủ.

Bên cạnh đó, tại sao các enzym giới hạn lại được thêm vào sau cùng?

Các enzyme hạn chế thường là Cuối cùng thành phần thêm phản ứng để đảm bảo rằng nó không tiếp xúc với các điều kiện khắc nghiệt. Phản ứng tập hợp nên được trộn sau men thêm vào. Trộn tất cả các dung dịch có chứa các enzym hạn chế nhẹ nhàng để tránh men sự ngừng hoạt động.

Hơn nữa, làm thế nào để cải thiện quá trình tiêu hóa bằng enzym giới hạn? Không sử dụng nhiều hơn khuyến nghị men số tiền (ví dụ: 10 đơn vị của men mỗi microgram DNA). Giảm số lượng men trong phản ứng, nếu cần thiết. Tránh ủ lâu tiêu hóa sự phản ứng lại. Sử dụng đệm phản ứng được khuyến nghị.

Cũng biết, tại sao một enzym giới hạn sẽ không cắt?

Quá trình chuẩn bị DNA được phân cắt Nên không có chất gây ô nhiễm như phenol, cloroform, cồn, EDTA, chất tẩy rửa hoặc quá nhiều muối, tất cả đều có thể gây cản trở enzyme hạn chế hoạt động. Nếu có chất ức chế (thường là muối, EDTA hoặc phenol), thì DNA đối chứng sẽ không cắt sau khi trộn.

Tại sao lượng enzim có thể gây ra hoạt động sao?

Hoạt động của ngôi sao là sự nới lỏng hoặc thay đổi tính chất cụ thể của hạn chế men sự phân cắt qua trung gian của DNA có thể xảy ra trong các điều kiện phản ứng khác biệt đáng kể với các điều kiện phản ứng tối ưu cho men . Hoạt động sao có thể xảy ra vì sự hiện diện của Mg²⁺, như Là chẳng hạn như trong HindIII.