Mục lục:

Tại sao cần phải tinh chế sản phẩm PCR trước khi giải trình tự?
Tại sao cần phải tinh chế sản phẩm PCR trước khi giải trình tự?

Video: Tại sao cần phải tinh chế sản phẩm PCR trước khi giải trình tự?

Video: Tại sao cần phải tinh chế sản phẩm PCR trước khi giải trình tự?
Video: Hướng dẫn test nhanh COVID-19 tại nhà - Khi nào âm tính, khi nào dương tính? 2024, Tháng mười một
Anonim

Xác minh mong muốn sản phẩm Là thiết yếu , bao gồm xác nhận thiếu Mỹ phẩm và sơn lót. Dọn dẹp -up của hỗn hợp phản ứng cũng là cần thiết để loại bỏ các mồi và dNTP không hợp nhất có thể gây trở ngại cho các phản ứng tiếp theo và dẫn đến một trình tự không thể đọc được.

Bên cạnh đó, tại sao cần phải tinh chế sản phẩm PCR?

Bạn cần phải tinh chế các sản phẩm PCR loại bỏ các đoạn mồi, nucleotide và enzyme không sử dụng để tối ưu hóa sự thành công của quá trình thắt, điều này sẽ duy trì và trình tự các sản phẩm của PCR . Đến thanh lọc NS Sản phẩm PCR , sắc ký loại trừ kích thước được sử dụng.

Người ta cũng có thể hỏi, bạn có nên tinh chế các sản phẩm PCR trước khi hạn chế tiêu hóa endonuclease không? Đa số sự hạn chế các enzym hoạt động trong PCR bộ đệm. Đối với các ứng dụng nhân bản, thanh lọc của Sản phẩm PCR trước khi tiêu hóa Là cần thiết để loại bỏ DNA polymerase ưa nhiệt hoạt động có trong PCR hỗn hợp. DNA polymerase có thể làm thay đổi các đầu của DNA bị phân cắt và làm giảm năng suất của quá trình thắt.

Mọi người cũng hỏi, làm thế nào để bạn chuẩn bị sản phẩm PCR để giải trình tự?

Trình tự trực tiếp các sản phẩm PCR

  1. Đảm bảo rằng bạn đã khuếch đại đúng phân đoạn.
  2. Bạn phải loại bỏ tất cả các mồi PCR còn sót lại và các nucleotide chưa hợp nhất.
  3. Nếu mồi PCR cũng là (các) mồi giải trình tự, hãy đảm bảo chúng phù hợp với các điều kiện của chúng tôi.
  4. Đừng tập trung quá mức mẫu!

Bạn có thể trình tự sản phẩm PCR không?

Trực tiếp Giải trình tự của Sản phẩm PCR . Giải trình tự chỉ sử dụng một sơn lót thay vì hai loại được sử dụng trong PCR . Nếu bạn làm không loại bỏ cả hai mồi, bạn sẽ nhận được hai trình tự chồng lên nhau mà không thể đọc được. Có thể sử dụng một PCR mồi cho trình tự miễn là nó phù hợp với điều kiện của chúng tôi.

Đề xuất: