Mục đích của việc sử dụng ddNTPs là gì?
Mục đích của việc sử dụng ddNTPs là gì?

Video: Mục đích của việc sử dụng ddNTPs là gì?

Video: Mục đích của việc sử dụng ddNTPs là gì?
Video: Sanger sequencing 2024, Tháng mười một
Anonim

DdNTP đề cập đến Dideoxynucleotides triphosphat được sử dụng trong phương pháp Sanger dideoxy để tạo ra các sợi DNA có độ dài khác nhau để giải trình tự DNA. Điều này dẫn đến việc chấm dứt quá trình polyme hóa DNA (hoặc kéo dài DNA) vì quá trình này cần một nhóm 3'-OH để tiếp tục.

Trong số đó, tại sao ddNTP được sử dụng trong giải trình tự?

Dideoxynucleotides là chất ức chế kéo dài chuỗi của DNA polymerase, đã sử dụng trong phương pháp Sanger cho DNA trình tự . Các dideoxyribonucleotide không có nhóm 3 'hydroxyl, do đó không thể xảy ra hiện tượng kéo dài chuỗi hơn nữa khi dideoxynucleotide này nằm trên chuỗi. Điều này có thể dẫn đến sự chấm dứt của DNA sự nối tiếp.

Tương tự, ddNTPs có gắn vào dNTPs không? Một hoặc nhiều dNTPs được gắn nhãn phóng xạ để giúp hình dung các sản phẩm sao chép. Cuối cùng, mỗi ống nhận được một trong bốn nucleotide đặc biệt được gọi là dideoxynucleotides ( ddNTPs ). Tuy nhiên, sau khi được kết hợp, DNA polymerase không thể mở rộng thêm chuỗi vì nó cần 3'-OH để gắn đến nucleotide tiếp theo.

Tương tự, người ta có thể hỏi, làm thế nào để các ddNTP dừng một phản ứng giải trình tự?

Khi xuất hiện với số lượng nhỏ trong trình tự phản ứng , dideoxyribonucleoside triphosphates ( ddNTPs ) chấm dứt phản ứng trình tự ở các vị trí khác nhau trong sợi DNA đang phát triển. ddNTPs dừng phản ứng giải trình tự vì chúng: làm cho DNA polymerase rơi ra khỏi sợi khuôn. NS.

Kỹ thuật nào liên quan đến Dideoxynucleotides có thể được sử dụng?

Trình tự Sanger là một phương pháp xác định trình tự DNA dựa trên sự kết hợp có chọn lọc của sự kết thúc chuỗi dideoxynucleotides bởi DNA polymerase trong quá trình sao chép DNA trong ống nghiệm. Được phát triển bởi Frederick Sanger và các đồng nghiệp vào năm 1977, nó là đã sử dụng trình tự phương pháp trong khoảng 40 năm.

Đề xuất: