Giải trình tự DNA Sanger hoạt động như thế nào?

2024 Tác giả: Stanley Ellington | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2023-12-16 00:25

Sanger trình tự dẫn đến việc hình thành các sản phẩm mở rộng có độ dài khác nhau được kết thúc bằng các dideoxynucleotide ở đầu 3 '. Các sản phẩm mở rộng sau đó được phân tách bằng Điện di mao quản hoặc CE. Các phân tử được đưa vào bởi một dòng điện vào một ống mao dẫn dài bằng thủy tinh chứa đầy một polyme gel.

Theo cách này, phương pháp Sanger giải trình tự DNA là gì?

Sanger trình tự , còn được gọi là kết thúc chuỗi phương pháp , là một kỹ thuật cho xét nghiệm DNA dựa trên sự kết hợp có chọn lọc của các dideoxynucleotide kết thúc chuỗi (ddNTPs) bằng cách DNA polymerase trong quá trình in vitro DNA nhân rộng. Nó được phát triển bởi Frederick Sanger và các đồng nghiệp vào năm 1977.

Ngoài ra, trình tự kết thúc chuỗi hoạt động như thế nào? DNA sáng hơn trình tự còn được gọi là chuỗi - chấm dứt phương pháp của trình tự . ddNTPs dẫn đến chấm dứt của sợi DNA vì ddNTPs thiếu nhóm 3'-OH cần thiết cho sự hình thành liên kết phosphodiester giữa các nucleotide. Nếu không có sự ràng buộc này, chuỗi nucleotide được hình thành là chấm dứt.

Đơn giản vậy, tại sao chúng ta lại giải trình tự Sanger?

Trình tự Sanger mới là Một phương pháp của xét nghiệm DNA dựa trên sự kết hợp có chọn lọc của các dideoxynucleotide kết thúc chuỗi bằng cách DNA polymerase trong quá trình in vitro DNA nhân rộng. Nó vẫn có lợi thế hơn so với đọc ngắn trình tự công nghệ (như Illumina) mà nó có thể sản xuất Chuỗi DNA lần đọc> 500 nucleotide.

Giải trình tự Sanger có chính xác không?

Sanger trình tự với 99,99% sự chính xác là "tiêu chuẩn vàng" cho nghiên cứu lâm sàng trình tự . Tuy nhiên, các công nghệ NGS mới hơn cũng đang trở nên phổ biến trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu lâm sàng do khả năng thông lượng cao hơn và chi phí cho mỗi mẫu thấp hơn.